JIA | 中国农业科学院柑桔研究所构建一个受柑橘溃疡病诱导转录因子的酵母单/双杂（Y1H/Y2H）高通量筛选系统
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阅读： 2024/1/25 9:37:45
以下文章来源于农业科学微平台 ，作者傅佳 等
柑橘是我国最重要的果树之一，柑橘产业在国民经济发展和乡村振兴事业中发挥重要作用。柑橘溃疡病严重危害着柑橘产业的发展。柑橘抵御溃疡病的调控网络复杂，包括蛋白质-DNA以及蛋白质-蛋白质等互作方式组成的调控途径。
近期，西南大学/中国农业科学院柑桔研究所国家柑桔品种改良中心完成的题为“High-throughput screening system of citrus bacterial canker-associated transcription factors and its application to the regulation of citrus canker resistance”研究在Journal of Integrative Agriculture (《农业科学学报》(英文)，JIA) 2024年1期正式发表。
该研究构建了一个含有203个受柑橘溃疡病诱导的转录因子酵母单/双杂（Y1H/Y2H）筛选系统。随机抽取30个克隆，可检测到清晰的插入序列，表明文库克隆阳性率为100%；30个转录因子的引物能够检测到大小正确的目标片段，表明文库的覆盖率为100%，因此，该文库的质量高。
柑橘溃疡病诱导型转录因子酵母文库的构建与评价
利用该系统对一个通过维持活性氧稳态来提高对柑橘溃疡病抗性的基因CsPrx25的上游调节因子进行了筛选，发现转录因子CsDOF5.8与CsPrx25的1-kb启动子片段互作。结合凝胶阻滞实验（EMSA）、双荧光素酶报告实验（Dual-LUC）以及CsDOF5.8的瞬时过表达，进一步验证了CsDOF5.8与CsPrx25的互作和转录调控。本研究揭示了CsDOF5.8直接调控CsPrx25来维持H2O2稳态，进而提高柑橘溃疡病抗性的调控途径。本溃疡病诱导型转录因子酵母文库是探究柑橘溃疡病抗性调控通路、建立抗病调控网络的有效工具。
利用溃疡病诱导型转录因子酵母文库筛选CsPrx25基因的上游调控因子
已毕业硕士研究生傅佳为该论文的第一作者，李强副教授和何永睿副研究员为论文的通信作者。樊捷，张晨希，符勇耀，线宝航，喻奇缘，黄馨，杨雯，陈善春等参与了本研究。该研究获得国家重点研发计划项目（2022YFD1201600）、现代农业（柑桔）产业技术体系（CARS-26）、中央高校基本科研业务费专项资金（SWU-XDJH202308）和重庆市教委科学技术研究项目（KJQN202001418）的支持。
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https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S2095311923003945?
Cite the article:
Jia Fu, Jie Fan, Chenxi Zhang, Yongyao Fu, Baohang Xian, Qiyuan Yu, Xin Huang, Wen Yang, Shanchun Chen, Yongrui He, Qiang Li. 2024. High-throughput screening system of citrus bacterial canker-associated transcription factors and its application to the regulation of citrus canker resistance . Journal of Integrative Agriculture, 23(1): 155-165.
研究团队简介
西南大学/中国农业科学院柑桔研究所国家柑桔品种改良中心主要开展柑橘抗病等重要功能基因发掘与作用机制解析、柑橘重要性状连锁分子标记开发与利用、柑橘高效分子育种技术创新与新种质创制、柑橘优良新品种的培育与示范推广等研究。先后承担“863”计划课题、国家重大研发计划课题等国家和省部级项目40余项；在Plant Biotechnology Journal、Plant Journal, Horticulture Researc, Journal of Integrative Agriculture等刊物发表论文100余篇；培养研究生60余人。
转自：“植物生物技术Pbj”微信公众号
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