背景值高？杂带干扰？WB注意这些问题，新手也能做出满意结果！
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阅读： 2022/3/30 15:37:40
很多朋友在后台留言问道：科科，为什么 WB 实验这么容易翻车？
虽然 WB 是一类基础实验，但是基础并不代表简单。从配置蛋白胶开始，到蛋白电泳、蛋白转膜、抗体孵育，这些环节中但凡有一个出错，就会导致实验的失败。
因此，今天科科特意整理了一些 WB 经验，希望帮助大家避开 WB 实验的坑。
WB实验结果分析
Q:
跑出来的条带奇形怪状，拖尾…..
这种情况主要是仪器和样品的原因，在实验中要小心制胶、合理上样、正确使用电泳仪、正确转膜就能很好的避免。
Q:
WB 结果中背景较高
① 膜封闭时间不够，室温下通常摇床孵育膜 1h，出现这种情况可以更换合适的封闭液或者适当延长封闭的时间；
② 抗原抗体免疫过程中一抗稀释度太高，可以多设置几组一抗浓度，摸索最适宜的抗体稀释度；
③ 在整个实验过程中膜发生干燥或手套反复接触过也会发生背景值高的情况，因此实验过程中要注意保持膜的湿润，使用镊子夹取膜。
Q:
WB 结果中有杂带干扰
① 抗体纯度不高会产生非特异性条带影响结果，高纯度抗体条带特异性更好，建议更换抗体；
② 一抗浓度过高，降低一抗稀释比，目的条带和杂带可能会减弱，有可能去掉杂带；
③ 电转后采用脱脂牛奶或 BSA 封闭，适当加长封闭时间可改善；
④ 洗膜的时候会将膜上的非目的蛋白洗脱，因此多次洗脱可以降低杂带干扰。
看到这里，是不是想要放弃了，只是WB就如此繁琐，全部实验做完至少也得10-12个月，写完SCI不得2-3年，哪里耗得起呢？
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